使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签

实验前的准备：用液体CM培养基过夜培养的细菌，2 ml离心管，1.5 ml离心管，蓝枪头一盒，黄枪头一盒，步骤10后必须打开金属浴和水浴锅，

1.取2.0 ml离心管，加入细菌培养液1 ml（细菌用液体CM培养基培养），离心1min，尽量吸净上清；

2. 向菌体沉淀中加入200 μl缓冲液GA，振荡至菌体彻底悬浮。

注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可略过第2步，加入溶菌酶溶液进行破壁处理，具体方法为：加入110 μl缓冲液（20 mM Tris，pH 8.0；2 mM Na2·EDTA； 1.2%Triten），和70 μl溶菌酶溶液（50 mg/ml，客户自备，目录号：RT401），37℃处理30 min以上。如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100mg/ml）溶液（客户自备，目录号：RT405-12），振荡15 sec，室温放置5 min。

3. 向管中加入20 μl Proteinase K溶液，混匀。

4. 加入220 μl缓冲液GB，振荡15 sec，70℃放置10 min，溶液应变清亮，简短离心以去除官盖内壁的水珠。

注意：加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀，一般70℃放置时会消失，不会影响后续实验。如溶液未变清亮，说明细胞裂解不彻底，可能导致提取DNA少量和提取出的DNA不纯。

5. 加220 μl无水乙醇，充分振荡15 sec，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内的水珠。

6. 将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中（吸附柱放在收集管中），12, 000 rpm离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

7. 向吸附柱CB3中加入500 μl缓冲液GD（使用前请检查是否已加入无水乙醇），12, 000 rpm离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

8. 向吸附柱CB3中加入600 μl漂洗液PW（使用前请检查是否已加入无水乙醇），12, 000 rpm离心1 min，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。

9. 重复操作步骤8

10. 将吸附柱CB3放回收集管中，12, 000 rpm离心2 min，倒掉废液，将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。

11. 将缓冲液TE置于60 ℃水浴预热，以提高膜的通透性；将吸附柱CB3转入一个干净的1.5 ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50 μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5 min，12, 000 rpm离心2 min，将溶液收集到离心管中。

12. 将收集到离心管中的溶液置于60℃ 金属浴2 min，吸取金属浴后的溶液再次滴加到CB3吸附柱的吸附膜上，室温放置2 min，12, 000 rpm离心2 min。

13. 测浓度，并将DNA稀释到合适的浓度后置于-20℃保存。