首先，登陆自己的NCBI账号，我这里是微软账号，你们也可以用其他的账号，都是一样的。

然后，点击submit

然后点击SRA

会跳出一个SRA tools，点击

然后点击submit

点击new submission

填写完自己的基础信息后，点击continue

这里，我之前没有提交这个数据的BioProject，所以两个都选择NO，下面这个释放日期我选择立刻释放，选择完毕后，点击continue

在这个页面填写测序数据的信息和描述，填写完信息之后，点击continue

下一步是选择样品类型，我的样本的甘蓝叶片，因此我输入甘蓝Brassica oleracea就有甘蓝物种的拉丁名，然后下面选择植物，点击continue。

下一步是天下Biosample的信息，我们选择下载excel表，填写好后再上传

下载下来的excel表是这样的，绿色的必填的，其他颜色的选填，填写完后，要在最后一列自己添加一个重复行，保证每行都不一样，直接写replicate = biosample replicate 1，然后下拉即可，上传，点击continue。

下一步，填写metadata数据，同样的，我们下载excel表

表黄色的列是必须填写的，RNA-seq数据按照如图所示填写即可。

上传后，点击continue

上传方式点击NCBI自带的Aspera Command，

然后，下载安装NCBI的上传软件：Aspera connect，然后下载key file

打开电脑的命令提示符，在搜索端输入cmd即可：

然后，在cmd下先进入Aspera connect的软件安装位置下的bin文件，比如我的是（cd是进入文件夹的意思）：

cd C:\Users\Administrator\AppData\Local\Programs\IBM\Aspera Connect\bin

然后输入以下代码：

这段代码中，第一个标明绿色的需要修改成你刚刚下载的key file的位置，并且加上key file的文件名，第二个标绿色的地方需要修改成你想上传的文件夹。比如我的是这样的

ascp -i C:\Users\Administrator\Downloads\aspera.openssh -QT -l100m -k1 -d F:
ascp -i C:\Users\Administrator\Downloads\aspera.openssh -QT -l100m -k1 -d F:\0测序数据和组学数据\2022霜霉病转录组初始数据\有参RNA-seq\GDRL22030423_std_1\0-4d subasp@upload.ncbi.nlm.nih.gov:uploads/wuyk1129_163.com_2MUOBLEn
测序数据和组学数据22霜霉病转录组初始数据\有参RNA-seq\GDRL22030423_std_1
ascp -i C:\Users\Administrator\Downloads\aspera.openssh -QT -l100m -k1 -d F:\0测序数据和组学数据\2022霜霉病转录组初始数据\有参RNA-seq\GDRL22030423_std_1\0-4d subasp@upload.ncbi.nlm.nih.gov:uploads/wuyk1129_163.com_2MUOBLEn
-4d subasp@upload.ncbi.nlm.nih.gov:uploads/wuyk1129_163.com_2MUOBLEn

其他地方不用修改，输入命令之后，按enter键运行，等待上传完成即可

这样就上传完了：

继续点击continue

等待NCBI信息同步：